石家庄地区奶牛乳房炎流行病学调查及相关研究

题名:石家庄地区奶牛乳房炎流行病学调查及相关研究
作者:刘磊
学位授予单位:河北师范大学
关键词:乳房炎病原菌;;多重PCR;;药物敏感性试验;;CMT;;关键点控制;;奶牛乳房炎;;SDS-PAGE
摘要:

 为了查清石家庄地区奶牛乳房炎中致病菌的感染几率,在应用国际通用的CMT进行奶牛全群试验后,将奶牛进行分群,确定健康牛、隐strong magnets性乳房炎感染牛、临床性乳房炎感染牛。进一步采取乳池奶,应用传统的方法分离鉴定所采集的奶样中的病原菌。从石家庄地区(新华区、鹿泉、灵寿、新乐、行唐、平山、深泽等地)共采集奶样206份,分离纯化出172株细菌,经鉴定,其中葡萄球菌27.91%(48/172)、链球菌11.63%(20/172)、肠杆菌58.14%(100/172)是主要致病菌。在检出菌的奶牛中,21%的奶牛分离出一种细菌,79%的奶牛分离出两种或两种以上的细菌,被检的隐性乳房炎奶牛的主要病原菌是葡萄球菌、无乳链球菌和肠杆菌。选取8株大肠杆菌、10株链球菌和16株葡萄球菌进行了药敏试验、溶血性试验。结果表明,三种主要细菌对多种抗生素产生了耐药性,只对环丙沙星、氟哌酸、庆大霉素、丁氨卡那霉素等较敏感;葡萄球菌溶血能力较强,另两种细菌溶血能力弱或不溶血,说明葡strong magnets萄球菌在奶牛乳房炎的患病过程中,致病力较强。

 采集92份隐性乳房炎的奶样,分别应用常规法和基因扩增法进行致病菌的检测,常规细菌鉴定法检测出金黄色葡萄球菌感染样58份,无乳链球菌感染样16份,大肠杆菌感染样46份。采用多重PCR从基因水平上对受感染奶样进行了检测,结果对70份临床疑似奶牛乳房炎感染样本进行检测,建立的PCR方法检测阳性样品数为58strong magnets份,阳性检出率为82.5%:传统生化方法检测阳性样品数为53份,阳性检出率为75.5%,二者的阳性符合率为92%,表明本实验建立了快速且特异性强的多重PCR检测方法。

 通过对奶牛乳房炎的三种主要致病菌金黄色葡萄球菌、链球菌和大肠杆菌进行超微粉中草药组方体外药敏试验,试验测定其最小抑菌浓度。结果表明,细胞破壁中草药组方对大肠杆菌的抑菌作用较好,其最小抑菌浓度(MIC)为125mg/ml,对金黄色葡萄球菌作用稍差,其MIC为250mg/ml,而对无乳链球菌作用最差,MIC在1000mg/ml以上。但总体效果较好。

 在前期实验的基础上,选用化学实验室合成的稀土配合物Eu(α-NMA)_3 phen·H_2O检测了对分离菌株抑菌作用,进而验证Eu萘甲酸的抑茵特性。用琼脂扩散法和滤纸片法(直径为0.5cm)测定配合物对大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、致病酵母的抑制作用,采用SDS-PAGE技术观察配合物对大肠埃http://www.chinamagnets.biz/希氏菌蛋白的作用情况。并比较配体phen,稀土Eu离子和配合物对大肠埃希氏菌菌体蛋白及膜蛋白的作用。结果表明Eu和配体配合形成的配合物具有了新的特性,配合物对细菌的膜蛋白没有明显影响。然而Eu萘甲酸具有广谱抑菌性,并对大肠杆菌蛋白产生了较大的影响。

 此外,针对石家庄市奶牛乳房炎的发病情况,结合生产和实验结果,提出了控制以下关键点的技术措施:①严格控制饲养环境中的http://www.chinamagnets.biz/病原体:②防止挤奶后乳头的污染;③科学合理使用挤奶器以减少乳房炎的发病几率;④控制由于牛感染造成的疾病传播;⑤防止干乳期乳房的感染;⑥通过接种疫苗增强机体抗感染能力;⑦设计合理的奶牛卧床,减少病原微生物直接侵入乳房;⑧定期检查牛群,时时监控,建立合理强制性监管机制。⑨建议使用中药超微粉防治奶牛乳房炎。
学位年度:2009